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去外泌體血清的制備步驟

更新時(shí)間:2024-08-26 點(diǎn)擊次數(shù):0 所屬欄目:行業(yè)信息

  “去外泌體血清”指的是經(jīng)過處理以去除外泌體(exosomes)成分的血清。外泌體是一類由細(xì)胞分泌的小囊泡,直徑大約在30-150納米之間,它們含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、RNA(包括miRNA和mRNA)等生物分子,并參與細(xì)胞間的通訊。在外泌體研究和某些細(xì)胞培養(yǎng)應(yīng)用中,去除血清中外泌體是很重要的一步,因?yàn)橥饷隗w可能干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果或影響細(xì)胞的行為。

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  去外泌體血清的制備通常包括以下幾個(gè)步驟:

  離心處理:

  低速離心:首先進(jìn)行低速離心(例如2000-3000 rpm)以去除血清中的大顆粒,如細(xì)胞碎片等。

  高速離心:隨后進(jìn)行高速離心(例如100,000 g以上),這一步是為了去除血清中外泌體。這個(gè)過程通常需要較長(zhǎng)時(shí)間(如數(shù)小時(shí)或過夜),以確保盡可能多地去除外泌體。

  超濾:

  使用超濾膜進(jìn)行過濾也是一個(gè)有效的方法。通過選擇合適孔徑大小的濾膜(如0.22 μm或更小),可以去除血清中外泌體。

  商品化試劑盒:

  市面上也有專門用于去除血清中外泌體的商品化試劑盒。這些試劑盒通常包含特定的試劑和步驟,可以簡(jiǎn)化去除過程,并且在一定程度上保證了去除效果的一致性和有效性。

  尺寸排阻層析(SEC):

  一些實(shí)驗(yàn)室也會(huì)使用尺寸排阻層析來去除外泌體,這種方法可以根據(jù)分子大小分離血清成分,從而去除外泌體。

  免疫沉淀:

  通過特異性抗體識(shí)別外泌體表面的標(biāo)志物,如CD63、CD9等,然后進(jìn)行免疫沉淀,也可以去除外泌體。

  在進(jìn)行去外泌體血清的制備時(shí),需要注意保持無菌條件,以防止污染。此外,去除外泌體的過程中可能會(huì)損失一些血清中的營(yíng)養(yǎng)成分,因此在選擇去除方法時(shí)需要權(quán)衡利弊。最后,去除外泌體的效果可以通過透射電子顯微鏡(TEM)、納米顆粒追蹤分析(NTA)等方法來驗(yàn)證。

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