上圖為蛋白上樣品25ug，下圖上樣量為10ug;客戶(hù)反饋：內(nèi)參為什么會(huì)這么高?蛋白上樣量減少，目標(biāo)蛋白和內(nèi)參蛋白不會(huì)都減少嗎?

　　技術(shù)回復(fù)：

　　(1)雖然降低了整體上樣量，但內(nèi)參條帶仍很粗可能是因?yàn)閮?nèi)參蛋白的表達(dá)量相對(duì)較高，即使上樣量降低，其在凝膠中的含量仍足以形成較粗的條帶;而目的蛋白可能本身表達(dá)量較低，上樣量降低后條帶變細(xì)。

　　(2)再一個(gè)內(nèi)參和目的蛋白的穩(wěn)定性不同，內(nèi)參蛋白一般更穩(wěn)定，在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不易降解，而目的蛋白可能相對(duì)不穩(wěn)定，上樣量降低后更容易受到影響。

　　(3)還有就是抗體特異性這塊。所用抗體對(duì)目的蛋白和內(nèi)參蛋白的結(jié)合特異性可能存在差異。如果抗體對(duì)目的蛋白的結(jié)合效率因上樣量降低而下降更多，就會(huì)導(dǎo)致目的條帶變細(xì);而對(duì)內(nèi)參蛋白的結(jié)合可能受影響較小，所以?xún)?nèi)參條帶較粗。