免疫熒光技術(shù)是生物醫(yī)學研究中一項強大而廣泛應用的工具，它利用特異性標記的抗體來高靈敏地探測和定位樣本中的特定蛋白質(zhì)。這項技術(shù)的核心基于抗體與抗原間的特異性結(jié)合，涉及以下關(guān)鍵步驟：目標抗原與抗體結(jié)合，隨后熒光標記的二抗抗體與復合物結(jié)合，從而揭示目標分子的位置和分布。

　　實驗前準備與操作技巧詳解：

　　細胞培養(yǎng)與涂片制作：

　　對于貼壁生長細胞，需提前將它們接種在預處理的蓋玻片上，待細胞單層形成后清洗并取出玻片。懸浮細胞則需離心后，用PBS洗滌，通過離心或直接涂片機制備片。

　　固定：

　　根據(jù)實驗需求選擇合適的固定劑固定細胞，固定后，細胞可在PBS中含疊氮環(huán)境下4℃保存長達3個月，正式實驗前需PBS洗滌三次，每次5分鐘。

　　通透處理：

　　若采用甲醛等交聯(lián)劑固定，需進行通透以確?？贵w能接觸抗原。選擇通透劑需考慮抗原特性，通透時長約5至15分鐘，之后再用PBS洗滌三次，每次5分鐘。

　　封閉：

　　使用封閉液封閉細胞，時間大約30分鐘，減少非特異性結(jié)合。

　　一抗結(jié)合：

　　室溫下孵育1小時或4℃過夜，之后PBST漂洗三次，每次5分鐘。

　　二抗結(jié)合：

　　間接免疫熒光需二抗，室溫避光下孵育1小時，BST漂洗后，每次5分鐘，z后用蒸餾水沖洗。

　　封片及觀測：

　　添加封片劑，封片后，熒光顯微鏡下觀察并記錄結(jié)果。