斑馬魚(Danio rerio)是一種常用的模式生物，廣泛應(yīng)用于生物學(xué)研究中，包括發(fā)育生物學(xué)、遺傳學(xué)和毒理學(xué)等領(lǐng)域。HE染色，即蘇木精-伊紅染色(Hematoxylin and Eosin staining)，是組織學(xué)中z常用的染色方法之一，用于觀察組織結(jié)構(gòu)和細胞形態(tài)。以下是進行斑馬魚HE染色實驗的基本步驟：

　　實驗材料

　　.斑馬魚樣品

　　.蘇木精染液

　　.伊紅染液

　　.脫水用酒精系列(50%，70%，80%，95%，100%)

　　.透明劑(如二甲苯)

　　.封片劑

　　.切片機(如果需要制作切片)

　　.玻片和蓋玻片

　　實驗步驟

　　1. 樣品準備

　　固定：將斑馬魚樣本放入適當?shù)墓潭ㄒ?如4%多聚甲醛)中固定數(shù)小時至過夜。

　　脫水：使用逐漸增加濃度的酒精系列對固定后的樣本進行脫水處理，最后使用100%酒精。

　　2. 包埋與切片

　　如果需要進行切片觀察，將脫水后的樣本在適當包埋介質(zhì)中包埋，并使用切片機制作薄片(通常為4-6微米厚)。

　　3. HE染色

　　蘇木精染色：將切片放入蘇木精染液中染色一定時間(通常是5-10分鐘)，具體時間根據(jù)染料強度調(diào)整。

　　分化：用水或1%鹽酸酒精溶液去除背景染色，使細胞核更加清晰。

　　伊紅染色：將切片放入伊紅染液中染色幾分鐘，以染色細胞質(zhì)和其他結(jié)構(gòu)。

　　4. 脫水與透明化

　　使用酒精系列逐步脫水，并通過透明劑(如二甲苯)處理以便于顯微鏡觀察。

　　5. 封片

　　在玻片上滴加適量封片劑，然后輕輕放置蓋玻片，避免氣泡產(chǎn)生。

　　6. 顯微鏡觀察

　　使用光學(xué)顯微鏡觀察并記錄結(jié)果。蘇木精會將細胞核染成藍色，而伊紅則將細胞質(zhì)及其他成分染成粉紅色或紅色。

　　注意事項

　　染色時間和濃度可能需要根據(jù)實際情況進行調(diào)整。

　　處理過程中的每一步驟都需要仔細操作，以確保z佳的染色效果和組織保存質(zhì)量。

　　對于特定的研究目的，可能還需要采取額外的處理步驟，例如抗原修復(fù)等。