透射電鏡(Transmission Electron Microscopy, TEM)是一種能夠提供高分辨率圖像的強大工具，特別適用于觀察細胞內(nèi)部的超微結(jié)構(gòu)，如線粒體。以下是使用TEM觀察線粒體形態(tài)的基本步驟和注意事項：

　　樣品準(zhǔn)備

　　選擇合適的組織或細胞樣本：通常需要從目標(biāo)生物體中獲取新鮮的組織或培養(yǎng)的細胞。

　　固定：使用化學(xué)固定劑(如戊二醛、多聚甲醛)迅速殺死并固定細胞，以保持其原始形態(tài)。

　　脫水：用一系列濃度遞增的乙醇或丙酮溶液逐步替換樣品中的水分，防止冰晶形成導(dǎo)致結(jié)構(gòu)損傷。

　　包埋：將脫水后的樣品浸入環(huán)氧樹脂等包埋介質(zhì)中，在特定溫度下聚合，制成適合切片的硬塊。

　　超薄切片：利用超薄切片機(Ultramicrotome)將包埋好的樣品切成厚度為50-70納米的薄片。

　　染色：為了增強對比度，可以對切片進行重金屬鹽(如鈾醋酸鹽、鉛檸檬酸鹽)的負染處理。

　　TEM操作

　　加載樣品：將制備好的超薄切片放置在銅網(wǎng)或其他支持膜上，并將其裝入TEM樣品夾中。

　　調(diào)整參數(shù)：根據(jù)樣品特性和所需分辨率設(shè)置加速電壓、放大倍數(shù)、聚焦等參數(shù)。對于觀察線粒體等亞細胞結(jié)構(gòu)，一般會選擇較高的放大倍數(shù)(例如幾萬倍到幾十萬倍)。

　　成像：通過電子束掃描樣品區(qū)域，收集透射過來的電子信號形成圖像?？梢酝ㄟ^數(shù)字相機記錄高質(zhì)量的圖像數(shù)據(jù)。

　　注意事項

　　避免污染：在整個樣品制備過程中要盡量減少外來雜質(zhì)的引入，確保觀察結(jié)果的真實性和準(zhǔn)確性。

　　優(yōu)化條件：不同的組織或細胞類型可能需要調(diào)整固定、脫水、包埋及染色的具體條件來獲得z佳的觀察效果。

　　防護措施：由于涉及到有毒化學(xué)試劑以及強電子束輻射，實驗人員需遵守相應(yīng)的實驗室安全規(guī)程。

　　通過上述步驟，可以清晰地觀察到線粒體的雙層膜結(jié)構(gòu)、嵴的排列方式以及其他細微特征，這對于研究細胞呼吸作用機制、疾病狀態(tài)下線粒體的變化等方面具有重要意義。