什么是超速離心法?

　　超速離心法(ultracentrifugation)是一種常用的技術(shù)手段，用于從細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血漿、尿液等多種生物液體中分離出外泌體(exosomes)。外泌體是一類(lèi)直徑大約在30-150納米之間的細(xì)胞外囊泡，它們能夠攜帶蛋白質(zhì)、mRNA、miRNA等生物分子，并在細(xì)胞間傳遞這些信息，因此在外泌體研究中具有重要的生物學(xué)意義。

　　超速離心法提取外泌體的步驟如下：

　　預(yù)處理：首先，需要收集并預(yù)處理樣品。如果是細(xì)胞培養(yǎng)上清液，則需要通過(guò)低速離心(300-2000 g)去除細(xì)胞碎片和其他大顆粒;如果是血液樣品，則需要先通過(guò)凝固和低速離心分離出血清或血漿。

　　初次離心：接下來(lái)進(jìn)行較高g值的離心(約2000-10000 g)，目的是進(jìn)一步去除細(xì)胞殘骸、死細(xì)胞以及其他較大顆粒。

　　超速離心：隨后，將上一步得到的上清液轉(zhuǎn)移到超速離心管中，并進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的高速離心(通常為100000 g，持續(xù)1-2小時(shí))，這樣可以有效地沉淀出外泌體。此時(shí)，沉淀物中含有外泌體，而上清液則包含較小的囊泡和其他物質(zhì)。

　　洗滌與再離心：為了純化外泌體，通常會(huì)使用PBS(磷酸鹽緩沖液)或其他適宜的緩沖液重新懸浮沉淀，并再次進(jìn)行超速離心。這一過(guò)程有助于去除可能存在的污染物，提高外泌體的純度。

　　保存與分析：最后，將得到的外泌體沉淀重新溶解于適量的緩沖液中，并可以用于后續(xù)的實(shí)驗(yàn)分析，如透射電子顯微鏡觀察、Nanoparticle Tracking Analysis (NTA) 測(cè)定粒徑分布、Western Blot 檢測(cè)標(biāo)志蛋白等。