1、接種細胞數(shù)：針對標準96孔板，貼壁細胞的最小接種量為1000個/孔 (100μl培養(yǎng)基)。若為白細胞，接種量不低于2500個/孔 (100μl培養(yǎng)基)。如若使用24孔板或6孔板，應(yīng)預(yù)先計算每孔相應(yīng)的接種量，并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10%加入CCK-8溶液。

　　2、空白對照：在不含細胞的培養(yǎng)基中加入CCK-8，測定450nm的吸光度即為空白對照。在細胞毒性實驗中，還應(yīng)考慮藥物的吸收，可在加入藥物的培養(yǎng)基中加入CCK-8，測定450nm的吸光度作為空白對照。

　　3、第一次做實驗時，建議先做幾個孔摸索接種細胞的數(shù)量和細胞達到實驗要求的培養(yǎng)時間，這是因為不同的細胞生長速度不同。

　　4、培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基、PBS或水。

　　5、藥物樣本初篩時可以適當(dāng)減少濃度梯度的數(shù)量，增大濃度梯度間的倍數(shù)。若要確定樣本的IC50則需要增加濃度梯度的數(shù)量，一般8-12個足矣。若有文獻參考，則根據(jù)文獻設(shè)置濃度梯度。

　　6、加入樣本時要注意溶解樣本的培養(yǎng)基中血清濃度對樣本的影響，部分樣本可能受血清影響較大，此時需使用無血清培養(yǎng)基溶解樣本。

　　7、加樣本前，要先吸出前面的培養(yǎng)基，但不可長期擱置防止細胞死亡，最好一塊板吸完，立即加入配好的不同濃度的樣本。

　　8、Calcein-AM遇到濕氣會分解，使用后請在-20度下密閉冷凍保存，防止水分進入。Calcein-AM儲備液用緩沖液或培養(yǎng)基等稀釋時盡量現(xiàn)配現(xiàn)用。

　　9、碘化丙啶(PI)有一定的致癌性，操作時一定要注意防護。若接觸到皮膚，需要立即用自來水清洗。