脯氨酸(Proline)是植物抗逆性(如干旱、低溫、鹽脅迫)的重要生理指標，其含量測定可通過分光光度法、液質聯(lián)用技術等實現(xiàn)。以下是主流檢測方案：

　　一、分光光度法(酸性茚三酮法)

　　?原理?

　　脯氨酸與酸性茚三酮反應生成紅色縮合物，在520nm波長下比色測定吸光度，通過標準曲線計算含量?。

　　?試劑與儀器?

　　?試劑?：3%磺基水楊酸、酸性茚三酮溶液(1.25g茚三酮+30mL冰醋酸+20mL 6mol/L磷酸)、甲苯?

　　?儀器?：722型分光光度計、沸水浴鍋、離心機?。

　　?操作步驟?

　　?標準曲線?：配制0-6μg/mL脯氨酸系列溶液，沸水浴顯色30min后甲苯萃取，520nm比色?。

　　?樣品處理?：0.5g葉片+5mL 3%磺基水楊酸沸水浴提取10min，過濾后取濾液顯色測定?。

　　二、其他檢測技術

　　?液質聯(lián)用(LC-MS)?

　　適用于痕量脯氨酸檢測，通過特征離子峰定量，靈敏度達ppt級?。

　　?熒光分析法?

　　脯氨酸與熒光試劑結合后測定熒光強度，適合微量樣本(如時間分辨熒光法)?。

　　三、注意事項

　　標準曲線需每日校準，顯色反應需嚴格控制溫度和時間(沸水浴30min±2min)?。

　　甲苯萃取后需靜置分層，避免乳化影響比色結果?。

　　四、結果計算

　　脯氨酸含量(μg/g鮮重)=(標準曲線查得值×提取液總體積)/(取樣量×測定液體積)?。